丹酚酸B对三氧化二砷诱导HepaRG人肝细胞损伤的保护作用

摘要：

目的:探讨丹酚酸B对三氧化二砷(As2O3)诱导的HepaRG人肝细胞损伤的保护作用及其机制.方法:采用5 μmol·L-1As2O3孵育24 h建立HepaRG人肝细胞损伤模型.实验设置空白组、模型组(As2O35μmol· L-1),单给药组(丹酚酸B 10μmol·L-1),丹酚酸B高浓度组(丹酚酸B 10μmol· L-1+ As2O35 μmol·L-1),丹酚酸B中浓度组(丹酚酸B5μmol·L-1+ As2O35μmol·L-),丹酚酸B低浓度组(丹酚酸B 2.5 μmol·L-1+As2O35μmol·L-).丹酚酸B预孵育2h,弃去含药培养基,继续用5μmol·L-1As2O3孵育24 h;实验终止,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡,Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术定量检测细胞凋亡率,JC-1荧光染色观察线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),蛋白激酶B(Akt),磷酸化Akt(p-Akt)表达对丹酚酸B的肝脏保护作用机制.结果:As2O3浓度依赖性的降低HepaRG细胞的存活率(P＜0.01);丹酚酸B单独作用2h对正常细胞活力无影响;丹酚酸B(5,10 μmol· L-1)预孵育2h可显著增加由As2O3引起的细胞存活率下降(P＜0.01).As2O3导致肝细胞凋亡比例显著上升(P＜0.01),丹酚酸B(10 μmol·L-1)预孵育可降低细胞凋亡率(P＜0.01);As2O3孵育24 h引起线粒体膜电位下降,丹酚酸B可维持线粒体膜电位,提示丹酚酸B的抗凋亡作用与其抑制凋亡线粒体通路有关;与As2O3组比较,丹酚酸B预处理升高了Bcl-2/Bax水平(P＜0.01),增加了p-Akt/Akt水平(P＜0.01).结论:丹酚酸B对As2O3诱导的肝细胞损伤具有保护作用,其作用机制与维持线粒体功能、抑制肝细胞凋亡有关.

关键词：丹酚酸B、三氧化二砷、肝细胞损伤、肝保护

所属期刊栏目：26

分类号：R22;R242;R2-031;R285.5(中医基础理论)

资助基金：国家科技重大专项2017ZX09301069

在线出版日期：2020-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：68-74