野三七鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达

摘要：

目的:对野三七中可能参与三萜皂苷合成的关键酶鲨烯环氧酶基因(PvfSE)进行克隆,并对其进行生物信息学分析和原核表达.方法:采用Trizol法提取野三七根的总RNA并反转录为cDNA第一链,基于野三七的转录组数据,设计PvfSE基因序列特异性引物,克隆基因全长,利用相关软件对该基因进行生物信息学分析,构建pMal-c2 X-PvfSE原核表达载体,在大肠埃希菌中诱导表达重组蛋白.结果:PvfSE开放阅读框为1 887 bp,编码628个氨基酸,蛋白相对分子质量为68.8 kDa,理论等电点为9.28,脂肪系数为95.18,亲水性系数为-0.060,不稳定指数为40.36,属于不稳定蛋白.生物信息学分析表明,PvfSE具有2个跨膜结构域,无信号肽,可能定位在叶绿体或细胞质膜上,具有FAD/NAD (P)结合域和鲨烯环氧酶结构域,属于混合型蛋白.PvfSE与西葫芦和芒柄花中参与三萜皂苷合成的鲨烯环化酶(CpSE1,CpSE3,OsSE1,OsSE2)亲缘关系较近.此外,在大肠埃希菌BL21 (DE3)中成功表达PvfSE的重组蛋白.结论:克隆得到PvfSE基因,并在大肠埃希菌中成功表达其重组蛋白,为进一步研究PvfSE的功能和解析野三七中三萜皂苷生物合成途径奠定了基础.

关键词：野三七、鲨烯环氧酶、基因克隆、生物信息学分析、原核表达

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分类号：R284.2;R289;R22;R2-031(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;云南省科技厅科技项目;云南省教育厅科研项目

在线出版日期：2019-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：147-153