10.13422/j.cnki.syfjx.20192113
垂序商陆PaAACT基因克隆和表达分析
目的:从垂序商陆根中克隆了商陆皂苷甲生物合成过程中关键酶乙酰乙酰辅酶A转移酶(acetoacetyl-CoA transferase,AACT)基因,进行生物信息学分析和原核表达.方法:提取垂序商陆根的总RNA,然后逆转录合成cDNA,在分析垂序商陆转录组数据的基础上,设计PaAACT基因的特异性引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增PaAACT基因的cDNA序列,通过构建原核表达载体pET-32a-PaAACT,诱导表达并且纯化目的蛋白.结果:PaAACT基因开放阅读框为1 254 bp,编码417个氨基酸.生物信息学分析显示PaAACT蛋白的分子式为C1 914H3 120N5380576S17,推测其相对分子质量为43.43 kDa,理论等电点8.90,不稳定系数32.27,属于稳定蛋白质.根据生物信息学分析结果,PaAACT蛋白属于硫解酶家族成员,在C末端含有硫解酶家族的1个保守位点和1个活性位点.PaAACT蛋白可能位于细胞质中、不含信号肽、没有跨膜区.系统进化分析显示PaAACT蛋白与甜菜等廖科植物AACT蛋白亲缘关系较近.经IPTG诱导,在大肠埃希菌BL21(DE3)菌株中表达了PaAACT重组蛋白,利用Ni2亲和色谱获得了纯化的目的蛋白.结论:该研究从垂序商陆中克隆PaAACT基因,为下一步测定PaAACT酶催化活性、制备抗体奠定基础,也为研究其在商陆皂苷甲生物合成途径中的作用提供理论依据.
垂序商陆、乙酰乙酰辅酶A转移酶、基因克隆、生物信息学分析、原核表达
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R289;R284.1;R22;R2-031(中药学)
国家重点研发计划;国家自然科学基金;国家科技重大专项;中央引导地方科技发展专项
2019-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
124-131
