泻心汤含药血清对RAW264.7源性泡沫细胞TLR9/MyD88/NF-κB p65信号通路的影响

摘要：

目的:通过体外细胞实验研究泻心汤对巨噬细胞源性泡沫细胞Toll样受体9(TLR9)信号通路的影响,探讨泻心汤抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:50只SPF级雄性SD大鼠随机分为泻心汤低、中、高剂量组(1.4,4.2,12.6 g·kg-1·d-1)及正常组,除正常组20只外,其余每组10只,正常组给予等体积的纯水灌胃,各组连续灌胃7d,末次给药1h后,分离血清,制备泻心汤低、中、高剂量组含药血清及正常组血清.用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)干预RAW264.7巨噬细胞分化为泡沫细胞.采用油红O染色法鉴定细胞泡沫化;噻唑蓝(MTT)比色法观察含药血清对巨噬细胞源性泡沫细胞增殖的影响后,选择各剂量浓度为20％的含药血清作用于泡沫细胞模型,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β),γ-干扰素(INF-γ)的含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别测定TLR9,髓样分化因子88(MyD88),核转录因子-κB(NF-κB) mRNA及蛋白表达.结果:油红O染色显示出ox-LDL干预后细胞内红色颗粒明显,泡沫细胞模型制备成功;MTT比色法结果显示,与正常组血清比较,泻心汤高剂量组含药血清在10％～30％浓度范围内,其细胞增殖差异无显著性.后续选择各剂量浓度为20％的含药血清干预经ox-LDL诱导的泡沫细胞,与正常组比较,模型组用ox-LDL干预后诱导了TLR9,MyD88,NF-κB p65,IL-1β,INF-γ的高表达(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,不同剂量组泻心汤含药血清干预后降低了TLR9,MyD88,NF-κB p65,IL-1β,INF-γ的表达(P ＜0.05,P＜0.01),且部分干预作用呈现出剂量依赖性.结论:泻心汤含药血清可抑制泡沫细胞TLR9/MyD88/NF-κB p65通路以及促炎因子IL-1β,INF-γ的转录和过表达,这可能是泻心汤抗动脉粥样硬化重要作用机制之一.

关键词：泻心汤、泡沫细胞、Toll样受体9、动脉粥样硬化、氧化低密度脂蛋白

所属期刊栏目：25

分类号：R2-0;R285.5;R289;R322.1

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;贵州省国内一流建设学科项目;贵州省普通高等学校工程研究中心项目

在线出版日期：2019-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：24-29