肾阳虚大鼠肾组织中microRNA差异性表达与信号通路分析

摘要：

目的:采用基因芯片检测腺嘌呤造模诱导肾阳虚证大鼠肾组织中显著差异表达的小分子核糖核酸(miRNA),并用生物信息学方法分析其意义.方法:模型组大鼠灌胃150 mg·kg-1腺嘌呤诱导肾阳虚肾损伤模型,正常组灌服等量生理盐水.麻醉处死后取部分肾组织病理切片做苏木素-伊红(HE)染色并检测血液中血尿素氮(BUN),血肌酐(SCr)的含量,尿液中24 h尿蛋白(24U-TP)含量;trizol法提取肾脏组织中RNA,RNA经检测质量合格后用于后续芯片分析.μParaflo(R)微流体芯片分析肾组织中差异表达的miRNA;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)进一步验证芯片结果;利用生物信息学网站分析差异表达miRNA的靶基因及其功能.结果:基因芯片结果显示造模后共有50个miRNA差异表达,与正常组比较,模型组只有9个miRNA在肾组织中高表达且具有显著性差异,其中,与正常组比较,模型组中rno-miR-21-5p,rno-let-7 i-5p,rno-miR-146b-5p和rno-miR-15b-5p表达明显升高(P ＜0.05,P＜0.01);rno-miR-6215,rno-miR-192-5p,rno-miR-378b,rno-miR-378a-3p和rno-miR-194-5p表达明显降低(P＜0.05).经PCR验证表明,与正常组比较,rno-miR-21-5p,rno-miR-146b-5p表达显著上升(P＜0.01);rno-miR-192-5p,rno-miR-378b,rno-miR-378a-3p,rno-miR-194-5p表达显著下降(P＜0.01).其中,miR-192,miR-21,miR-378与上皮细胞-间充质转化/间充质-上皮细胞转化(EMT/MET)平衡相关,miR-192和miR-378可作为抗纤维化因子保护肾脏,而miR-21可作为促纤维化因子诱导肾脏损伤.miR-194可通过靶向调控脑Ras同源蛋白(Rheb)拮抗缺氧再灌注诱导的人肾近端肾小管上皮细胞HK-2损伤.这些差异miRNA的靶基因主要富集在Wnt和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路上.这两条信号通路与EMT/MET平衡密切相关.结论:通过基因芯片表达谱,发现4个参与肾间质纤维化(RIF)作用调节和2个未知功能miRNA表达.为进一步深入分析肾阳虚的调控网络提供了一个新的线索.

关键词：肾阳虚、肾间质纤维、上皮细胞-间充质转化(EMT)、microRNA、生物信息

所属期刊栏目：25

分类号：R2-0;R285.5;R289

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;浙江省中医药科技计划;大学生创新创业孵化项目

在线出版日期：2019-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：57-63