紫苏叶水提物对阿霉素致HK-2细胞氧化损伤的保护及机制

摘要：

目的:探讨阿霉素(ADR)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)发生氧化损伤后,紫苏叶水提取物(PFAE)对其细胞活性、氧化损伤标记物及细胞凋亡等关键因子的影响.方法:ADR刺激HK-2细胞建立损伤模型,使用N-乙酰半胱氨酸(NAC)或不同浓度PFAE(5,15,45 g·L-1)干预后,采用细胞增殖/毒性检测(CCK-8)法检测细胞存活率,结合光镜下细胞形态变化,筛选出PFAE保护细胞的最佳浓度.后续实验分为6组:空白组,ADR(0.05 g·L-1)组,PFAE(15 g·L-1)组,ADR+ PFAE(0.05+15) g·L-1组,NAC(0.81 g·L-1)组,ADR +NAC(0.05 +81)g·L-1组.检测细胞匀浆中的丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)和细胞总抗氧化能力,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术及脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TUNEL)染色法检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞线粒体凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9和3(Caspase-9,Caspase-3),聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)包括其剪切体的表达,及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK),细胞外信号调节激酶(ERK),c-Jun氨基端激酶(JNK)及其磷酸化蛋白的表达.结果:与空白组比较,ADR组的细胞活性显著降低(P＜0.01),与ADR组比较,5,15 g·L-1的PFAE和NAC能促进细胞的增殖(P＜0.01).与空白组比较,ADR组抗氧化能力和SOD水平显著降低(P＜0.01),MDA和ROS的水平显著增高(P＜0.01),与ADR组比较,ADR+ PFAE组和ADR+NAC组抗氧化能力和SOD水平显著升高(P＜0.01),MDA和ROS的水平显著下降(P＜0.01).与空白组比较,ADR组细胞凋亡率上升(P＜0.01),凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2,cleaved Caspase-9/Caspase-9,cleaved Caspase-3/Caspase-3,cleavedPARP/PARP水平显著上升(P＜0.01),MAPKs通路中的p38 MAPK,ERK和JNK的磷酸化蛋白表达明显增高(P ＜0.05,P＜0.01);与ADR组比较,PFAE或NAC干预后减轻了细胞凋亡率,降低了凋亡蛋白的相对比值,并且抑制了MAPK信号通路中p38 MAPK,ERK蛋白的磷酸化(P＜0.01),但对磷酸化的JNK蛋白表达无影响.结论:PFAE可以减轻ADR诱导的HK-2细胞氧化损伤,并发挥抗氧化作用,通过线粒体凋亡途径和ERK/p38 MAPK信号通路来抑制细胞凋亡.

关键词：紫苏叶水提物、肾小管上皮细胞、阿霉素、氧化应激、线粒体凋亡、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路

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分类号：R285;R730.2;R364.5;R978.7(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;江苏省"六大人才高峰"高层次人才项目;江苏省中医院高峰学术人才项目

在线出版日期：2019-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：50-57