胡黄连苦苷Ⅱ通过下调microRNA-1表达抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡

摘要：

目的:研究胡黄连苦苷Ⅱ(picrosideⅡ)对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡中微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)及下游靶基因抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达的影响,探讨胡黄连苦苷Ⅱ的心肌保护作用及其机制.方法:将H9c2心肌细胞随机分为正常组,模型组(H2O2,200 μmol·L-1),胡黄连苦苷Ⅱ(50,100,200 μmol·L-1)+H2O2(200 μmol·L-1)组,胡黄连苦苷Ⅱ200μ,mol·L-1组.胡黄连苦苷Ⅱ与心肌细胞孵育6h后,加入H2O2继续培养2h.药物处理结束后,噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测细胞存活率,比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(destination access point identifier,DAPI)染色和细胞凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)检测评估细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中Caspase-3,Bcl-2,miR-1 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Westem blot)检测细胞抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达.结果:与正常组相比,H2O2能显著降低细胞生存率,增加细胞凋亡率,且Caspase-3活性和mRNA表达均增加(P＜0.01),同时伴有miR-1 mRNA表达水平的上调及其下游靶基因抗凋亡因子Bcl-2 mRNA表达的下调(P＜0.01).与模型组比较,胡黄连苦苷Ⅱ预处理可明显升高细胞存活率,明显降低LDH活性,降低细胞凋亡率,明显降低Caspase-3活性和mRNA表达(P＜0.05,P＜0.01),并使Bcl-2 mRNA表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),Western blot结果表明,胡黄连苦苷Ⅱ能明显下调其下游靶基因抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论:胡黄连苦苷Ⅱ对H2O2诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制与下调miR-1的表达进而上调其靶基因Bcl-2的表达有关.

关键词：胡黄连苦苷Ⅱ、H9c2心肌细胞、过氧化氢、凋亡、微小RNA-1

所属期刊栏目：25

分类号：R2-0;R22;R285.5

资助基金：国家自然科学基金;广西自然科学基金;广西卫计委资助项目

在线出版日期：2019-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：77-82