欧洲花楸糖基转移酶基因的全长克隆与表达分析

摘要：

目的:研究欧洲花楸植保素糖基化修饰的相关基因,从欧洲花楸悬浮细胞中克隆糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)基因,进行序列分析和原核表达.方法:基于欧洲花楸转录组数据设计特异性引物,克隆得到2条SaUGTs基因的cDNA序列,构建HIS-MBP-pET28a-SaUGTs原核表达载体,诱导表达SaUGTs重组蛋白.结果:克隆得到2条糖基转移酶基因SaUGT1和SaUGT2序列,完整开放阅读框为1 458 bp和1 431 bp,分别编码485和476个氨基酸,相对分子质量为54.27 kDa和53.49 kDa,理论等电点为5.50和5.63.生物信息学分析显示,无信号肽,含有糖基转移酶家族保守结构域(PSPG).系统进化结果显示SaUGT1和SaUGT2蛋白与拟南芥UGT85家族亲缘关系较近.实时荧光定量PCR检测显示,欧洲花楸悬浮细胞经酵母提取物(YE)诱导后,SaUGT1和SaUGT2的相对表达量明显上调,分别在24 h和12h达到最大值.通过IPTG诱导,在大肠埃希菌中成功表达SaUGT1和SaUGT2重组蛋白,并得到了纯化的重组蛋白.结论:该研究首次在欧洲花楸中克隆得到糖基转移酶基因,并成功构建了原核表达载体,为进一步研究该类基因的功能奠定了基础.

关键词：欧洲花楸、糖基转移酶、全长克隆、表达分析

所属期刊栏目：25

分类号：R284.1;R289;R22;R2-03(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;中央本级重大增减支项目;中国中医科学院重点领域项目

在线出版日期：2019-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：167-172