PI3K介导的Nrf2磷酸化激活在槲皮素抑制山岗橐吾碱肝细胞毒性中的作用

摘要：

目的:观察磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)介导的核转录因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)激活在槲皮素(quercetin,Quer)抑制山岗橐吾碱(clivorine,Cliv)诱导的人正常肝L-02细胞毒性中的作用.方法:L-02细胞与Quer(1,10,25,50 μmol·L-)预孵15 min后,再与Cliv(50 μmol·L-1)孵育48 h,采用噻唑蓝(thiazolam blue,MTT)比色法检测细胞存活率.检测细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)和还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH),并进一步通过双荧光素酶报告基因法检测Nrf2的核转位激活.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2和PI3K的磷酸化.实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分析Nrf2下游基因血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,Hmox1),NADPH醌氧化还原酶-1(NADPH:quinone oxidoreductase-1,Nqo1),谷氨酰-半胱氨酸连接酶催化亚基(catalytic subunit of glutamate-cysteine ligase,Gclc)和谷氨酰-半胱氨酸连接酶调节亚基(modifier subunit of glutamate-cysteine ligase,Gclm) mRNA的表达.结果:与空白组比较,Quer(10,25,50μmol· L-)能明显逆转Cliv降低的L-02细胞存活率(P＜0.05),且能逆转Cliv降低的L-02细胞内GSH含量(P＜0.05),升高ROS水平(P＜0.01).Quer能诱导PI3K的磷酸化(P＜0.05),Quer可以诱导Nrf2的磷酸化和转录激活(P＜0.05).Quer能使Nrf2下游mRNA表达水平提高(P＜0.05),PI3K抑制剂LY294002(LY)能阻断Quer对Hmox1 mRNA表达的升高作用(P＜0.01).结论:Quer通过诱导Nrf2磷酸化激活逆转了Cliv诱导的肝细胞毒性,PI3K在Quer诱导的Nrf2磷酸化激活中发挥了重要作用.

关键词：槲皮素、磷脂酰肌醇-3-激酶、核转录因子E2相关因子2、肝毒性、山岗橐吾碱

所属期刊栏目：25

分类号：R22;R242;R2-031;R285.5;R273(中医基础理论)

资助基金：上海中医药大学预算内科研项目;上海市曙光计划

在线出版日期：2019-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：112-118