基于HSF1高表达H9c2细胞的参芎葡萄糖注射液抗氧化损伤作用探讨

摘要：

目的:建立热休克转录因子1(HSF1)高表达的H9c2细胞系,考察在HSF1高表达的情况下参芎葡萄糖注射液(SGI)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用.方法:构建GV1422-HSF1的重组质粒,并利用FuGENE 6转染试剂将重组质粒转染至H9c2细胞中,用遗传霉素(G418)来筛选稳定转染细胞株,并用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSF1和热休克蛋白70(HSP70) mRNA和蛋白的表达情况,来鉴定HSF1高表达的H9c2细胞系(H9c2-HSF1)是否建立成功.用H2O2(300 μmol·L-)处理H9c2-HSF1细胞0.5h构建氧化损伤模型,考察HSF1高表达的情况下参芎葡萄糖注射液预处理对细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)漏出量、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,同时Western blot检测HSF1和HSP70蛋白表达情况.结果:Real-time PCR和Western blot实验结果显示:筛选出来的稳定转染细胞的HSF1和HSP70蛋白表达显著上调(P＜0.01),表明H9c2-HSF1细胞系构建成功.经参芎葡萄糖注射液预处理6h,H202损伤0.5h后,与H9c2+ H2O2组和H9c2-HSF1+ H2O2组比较,对应给药组细胞的HSF1和HSP70蛋白表达显著上调(P＜0.01),细胞存活率显著增高(P＜0.01),LDH,CK释放量和MDA含量显著减少(P＜0.01);ROS含量显著降低,GSH-Px和SOD活性明显升高.结论:本研究成功构建了HSF1高表达H9c2细胞系,并发现HSF1高表达能明显增强参芎葡萄糖注射液抗氧化损伤作用,其机制可能不在于增加细胞清除ROS能力,但可能与上调HSP70表达相关,需要进一步研究.

关键词：热休克转录因子1 (HSF1)、参芎葡萄糖注射液、过氧化氢(H2O2)、H9c2细胞系、抗氧化损伤作用

所属期刊栏目：24

分类号：R22;R24;R285.5;R289(中医基础理论)

资助基金：国家自然科学基金;贵州省中医药局中医药、民族医药科学技术研究项目;贵州省科学技术厅人才团队项目;贵州省科学技术厅人才团队项目;贵州省教育厅项目

在线出版日期：2018-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：85-90