清肺口服液通过ERK1/2通路调控RSV所致呼吸道炎症损伤的机制

摘要：

目的:通过研究清肺口服液对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染后气道上皮细胞胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/2)磷酸化蛋白及相关炎症因子表达的影响,探讨清肺口服液抗RSV感染及其继发炎症损伤的调节机制.方法:RSV体外感染人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,16-HBE)建立气道上皮炎症损伤模型,设置空白组,模型组(RSV),利巴韦林组(利巴韦林),清肺口服液高、中、低质量浓度组,共6组.其中空白组给予含2％ FBS的RPIM 1640培养基进行培养,其余各组在空白组的基础上造模,模型组加入等量RSV(MOI=1),利巴韦林组加入等量利巴韦林注射液(0.2 mg·L-1),清肺口服液组给予清肺口服液高、中、低质量浓度(200,100,50 mg·L-1)进行干预.应用噻唑蓝(tetrazolium salt eolorimetry,MTT)比色法检测清肺口服液对RSV感染16-HBE的毒性作用,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测清肺口服液对细胞中RSV复制的影响,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检验ERK1/2信号通路相关蛋白磷酸化表达变化,同时用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平.结果:与空白组比较,模型组RSV大量增殖,16-HBE出现典型的炎症损伤表现,ERK1/2磷酸化蛋白水平显著提高(P＜0.01),同时细胞上清中释放大量的炎症因子IL-6,IL-8(P＜0.01).加入清肺口服液或利巴韦林后,16-HBE中的RSV复制水平显著降低(P＜0.01),且清肺口服液(200,100 mg·L-1)可显著下调ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P＜0.01),并显著降低细胞上清中炎症因子IL-6,IL-8的表达水平(P＜0.01).结论:清肺口服液能够抑制RSV病毒复制并减轻RSV感染所致的气道炎症损伤,其机制可能与下调ERK1/2磷酸化蛋白水平及降低气道炎症因子的表达有关.

关键词：清肺口服液、呼吸道合胞病毒、细胞外信号调节蛋白激酶、白细胞介素-6、白细胞介素-8

所属期刊栏目：24

分类号：R22;R24;R285.5(中医基础理论)

资助基金：国家自然科学基金;上海交通大学科技创新专项

在线出版日期：2018-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：86-91