天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导PC12细胞凋亡JNK通路的影响

摘要：

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其是否通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路发挥神经保护作用.方法:将32只SD大鼠随机分为空白组、天麻钩藤饮低、中、高剂量组,每组8只.天麻钩藤饮按照5.7,11.4,22.8 g·kg-1灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备空白和含药血清.PC12细胞常规培养并分为空白组、模型组、天麻钩藤饮含药血清低、中、高剂量组,空白组和模型组加空白血清,其他3组加10％的天麻钩藤饮含药血清,孵育30 min后,模型组和含药血清组再加500 μmol·L-1 MPP+共孵育48 h后收集细胞,采用Cell Titer 96(R)Aoueous MTS Reagent powder(MTS法)检测细胞存活率.后续实验分为5组,即:空白组,MPP+组,MPP++含药血清高剂量组,MPP++SP600125组,MPP++含药血清高剂量+SP600125组,采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,分光光度法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测JNK,p-JNK,c-Jun,p-c-Jun蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低(P＜0.05);与模型组比较,10％的天麻钩藤饮低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加(P＜0.05).后续试验中,与空白组比较,MPP+组细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显升高(P＜0.05).与MPP+组比较,MPP++含药血清高剂量组,MPP++SP600125组均能够使细胞凋亡率,Caspase-3活性,p-JNK和p-c-Jun蛋白表达明显降低(P＜0.05),而MPP++含药血清高剂量+ SP600125组的作用明显高于MPP++含药血清高剂量组(P＜0.05),但不高于MPP++SP600125组.JNK和c-Jun蛋白表达无明显变化.结论:天麻钩藤饮含药血清对Mpp+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与JNK信号通路密切相关.

关键词：天麻钩藤饮、血清药理、神经保护、细胞凋亡、1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：黑龙江省教育厅2016年度基本科研业务费项目2016-KYYWF-0854

在线出版日期：2017-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：141-146