紫草素通过氧化胁迫诱导K562细胞凋亡

摘要：

目的:研究紫草素(shikonin)诱导人红白血病细胞(K562)凋亡作用并初步探讨其机制.方法:噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)染色法检测紫草素对K562细胞的增殖抑制作用；Hoechst 33258和吖啶橙(acridine orange,AO)/溴化乙啶(ethidium bromide,EB)染色法观察细胞凋亡形态；反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测与凋亡相关基因:B细胞淋巴因子基因2相关X蛋白(B-cell lymphoma gene 2 associated X protein,Bax)、B细胞淋巴因子基因2同源3结构域相互作用基团死亡促进因子(BH3 interacting domain death agonist,Bid)、B细胞淋巴因子基因xL(B-cell lymphoma gene xL,Bcl-xL)、p53上调凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)、B细胞淋巴因子基因2同源拮抗因子(B-cell lymphoma gene 2 homologous antagonist,Bak)、B细胞淋巴因子-w(B-cell lymphoma-w,Bcl-w)、B细胞淋巴因子基因2相关死亡促进因子(B-cell lymphoma gene 2 associated death promoter,Bad)信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)表达的变化；荧光染料二乙酸-2”,7”-二氯荧光素盐(oxalic acid-2”,7”-dichlorofluorescein,DCFHDA)分析细胞内总活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的变化；荧光染料5-氯甲基二已酸荧光素(5-chloromethylfluorescein diacetate,CMFDA)分析细胞内还原型谷胱甘肽(reduced glutathione hormone,GSH)含量的变化.结果:①0.2～1.6 mg·L-1的紫草素对K562细胞增殖呈浓度依赖性抑制；②0.2～0.5 mg·L-1的紫草素处理组细胞出现明显凋亡特征；③0.2～0.5 mg·L-1的紫草素处理组促凋亡蛋白Bid,Bad,Bak,PUMA,Bax的mRNA表达显著增加,抑制凋亡蛋白Bcl-w和Bcl-xL的mRNA表达明显下调；④0.2～0.5 mg·L-1的紫草素处理组,细胞内总活性氧含量升高,还原型谷胱甘肽含量降低.结论:紫草素有较强的抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的作用,该过程伴随细胞内氧化还原状态的改变,紫草素诱导的K562细胞的凋亡与细胞内氧化胁迫有关.

关键词：紫草素、K562细胞、凋亡、活性氧

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：新疆生产建兵团杰出青年创新基金专项2011CD0006;新疆生产建设兵团医药科技攻关计划专项2010GG36

在线出版日期：2013-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：221-225