基于CRISPR/Cas9技术构建Plcz1基因敲除小鼠模型

摘要：

目的 利用CRISPR/Cas9系统构建精子特异性磷脂酶C zeta-1(phospholipase C zeta1,Plcz1)基因敲除(Plcz1-/-)小鼠模型,探讨Plcz1基因在雄性小鼠生育过程中的作用.方法 选择小鼠Plcz1基因第6、7外显子作为靶位点,前后两个位点设计2对sgRNA序列,再将2对sgRNA以Golden Gate方法插入pX330A质粒中,构建pX330-sgRNA重组质粒.经扩增、纯化后,将重组质粒显微注射进小鼠受精卵原核中,进行胚胎移植至代孕母鼠,F0代小鼠出生后,提取其尾DNA进行PCR鉴定和DNA测序分析.通过F0代与野生型小鼠交配得到F1代小鼠,F1代交配繁殖至F2代获得Plcz1基因缺失的小鼠纯合品系,Plcz1-/-与野生型小鼠交配,分析Plcz1-/-雄鼠的生育能力.结果 成功构建pX330-sgRNA重组质粒,通过繁育和测序筛选获得3只Plcz1-/-雄鼠(Plcz1m3、Plcz1m4、Plcz1m5),对3只小鼠进行目的基因测序发现:(1)Plcz1m3:Plcz1基因第6、7外显子区域缺失3078 bp;(2)Plcz1m4:第7外显子区域缺失7 bp,该小鼠在饲养过程中死亡;(3)Plcz1m5:Plcz1基因第6外显子区域缺失1 bp.结论 利用CRISPR/Cas9,成功获得Plcz1-/-雄性小鼠,Plcz1-/-雄性小鼠可育,但与野生型小鼠相比,其生育能力明显下降.

关键词：Plcz1、CRISPR/Cas9、序列测定、基因敲除、小鼠

所属期刊栏目：32

分类号：R-33(医学研究方法)

资助基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目;国家自然科学基金;江苏省自然科学基金青年项目;江苏省高等学校自然科学研究面上项目

在线出版日期：2022-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：101-108