骨肉瘤干细胞来源外泌体对T细胞增殖及分化的影响

摘要：

目的 探讨骨肉瘤干细胞(osteosarcoma stem cells,OSCs)来源的外泌体对T细胞增殖及分化的影响及其相关作用机制.方法 采用无血清悬浮培养获得OSCs,并利用干细胞标志物流式分选技术进行鉴定.试剂盒提取骨肉瘤干细胞分泌的外泌体(OSCs-exo),利用透射电镜、粒径分析及Western blot实验进行鉴定.将OSCs-exo与PBMC进行共培养,CFSE染色及细胞流式实验检测其对T细胞增殖的影响.Western blot实验检测ERK信号通路中ERK蛋白的磷酸化改变.免疫磁珠分选CD4+T细胞,并将其与OSCs-exo在不同CD4+T细胞亚群诱导分化液中进行共培养,细胞流式实验检测OSCs-exo对后者分化的影响.Western blot实验检测STAT信号通路中磷酸化STAT1、STAT3、STAT5蛋白的表达.结果 成功分离获得了OSCs CD133+MG-63,透视电镜、粒径分析及Western blot实验结果表明OSCs-exo为直径在30～100 nm的圆形或椭圆形囊泡结构,其高表达外泌体标志性蛋白CD63、HSP70.CFSE染色及细胞流式实验及Western blot实验结果显示OSCs-exo可能通过抑制ERK蛋白磷酸化抑制CD3+、CD4+、CD8+T细胞的增殖,通过抑制磷酸化STAT1、STAT3蛋白的表达抑制CD4+T细胞向Th1、Th17并促进其向Th2、Treg细胞的分化.结论 骨肉瘤干细胞来源的外泌体能够通过下调ERK蛋白的磷酸化抑制T细胞的增殖,并降低磷酸化STAT1与STAT3蛋白的表达以诱导CD4+T细胞向Th2、Treg细胞分化,而抑制其向Th1、Th17的分化,从而下调细胞免疫功能,促进肿瘤的进展.

关键词：骨肉瘤干细胞、外泌体、T细胞、ERK、STAT

所属期刊栏目：30

分类号：R-33(医学研究方法)

资助基金：四川省教育厅课题17ZA0165

在线出版日期：2020-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：21-29