利用Pdl1敲除的巨噬细胞转录谱分析结核感染中PD-L1作用相关的候选基因

摘要：

目的 分析结核菌(Mtb)感染的程序性死亡配体1(Pdl1)特异性敲除的巨噬细胞(MΦ)转录谱变化,筛选MΦ内PD-L1作用相关的候选基因.方法 构建敲除小鼠(Pdl1Flox-),通过Cre-loxp技术培育出MΦ上Pdl1特异性敲除的纯合和杂合小鼠(Pdl1Flox/Flox-Cre,Pdl1Flox/--Cre),用PCR和流式细胞术验证.分离上述小鼠腹腔MΦ,利用转录组测序技术检测Mtb感染MΦ 24 h的表达谱,以同窝阴性小鼠(Pdl1Flox/Flox)为对照,进行生物信息学分析.结果 PCR和流式细胞术证实小鼠敲除成功.纯合、杂合及同窝阴性小鼠感染前后相比,差异表达基因最显著富集项为参与免疫反应和免疫过程的GO(P< 0.01;P< 0.01),筛出17个PD-L1相关的候选基因.通过KEGG富集分析,最显著富集的通路有Toll样受体、NF-κB信号通路等(P < 0.01;P < 0.01),筛出6个候选基因.结论 通过转录谱分析,确定与免疫反应及免疫过程有关的Ccl2、Qa5、Il12a等17个基因,免疫及炎症相关代谢通路的Ptgs2、Cd40、Card11等6个基因为Mtb感染的MΦ内PD-L1相关的候选基因,除Il6外均为本研究新筛选的候选基因.

关键词：结核分枝杆菌、巨噬细胞、Pdl1基因敲除、Cre/loxp重组酶系统、转录组测序

所属期刊栏目：30

分类号：R-33(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金81701986

在线出版日期：2020-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：31-39