树鼩粪便中沙门氏菌LAMP检测方法建立及应用

摘要：

目的 建立树鼩粪便沙门氏菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并对此方法进行初步应用.方法 根据沙门氏菌种属特异性基因invA(侵袭蛋白基因A)的保守序列,设计合成特异性LAMP引物.分别设定十个反应温度即57℃ ~66℃和十个反应时间即24~42 min进行优化,并测定本方法的特异性和灵敏度;同时进行普通PCR实验,作为本方法的验证和比较.用建立的LAMP法对91份野生来源的树鼩稀便样品进行检测.结果优化反应条件选出反应温度为62℃,反应时间34 min;该方法对沙门氏菌的灵敏度可达3.36×101CFU/mL,比普通PCR方法高10~100倍;对10种树鼩来源的肠道细菌进行LAMP检测,只有沙门氏菌属的肠炎沙门氏菌和乙型副伤寒沙门氏菌检测为阳性,其余为阴性;对91份野生树鼩粪便样品进行LAMP检测,阳性检出率为20.88%;LAMP法的所有反应可在40 min内完成.结果 可通过肉眼观察颜色变化直接判定.结论 所建立的LAMP方法具有便捷、快速、灵敏、特异等特点,可用于树鼩粪便中沙门氏菌的大规模快速检测.

关键词：沙门氏菌、环介导等温扩增、粪便样品、树鼩

所属期刊栏目：28

分类号：R-33(医学研究方法)

资助基金：云南省科技人才和平台计划项目2017HC019;重点实验室运行补助专项2017DG008;云南省重大科技专项2017ZF007

在线出版日期：2018-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：90-97