利用 CRISPR／Cas9技术构建 miRNA－29 b1基因敲除小鼠

摘要：

目的：应用CRISPR／Cas9技术构建miRNA－29b1基因敲除小鼠。方法针对miRNA－29b1基因设计一段sgRNA，sgRNA和Cas9体外转录后显微注射至C57BL／6小鼠受精卵细胞。小鼠出生后取其基因组DNA进行测序以鉴定基因型，同时取小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器研磨后提取总RNA，通过real－time PCR分析miRNA－29b1在这些脏器中的表达。结果设计了20 bp的miRNA－29b1sgRNA并与Cas9一起进行了体外转录，显微注射小鼠受精卵细胞后获得miRNA－29b1基因突变小鼠。测序结果表明突变小鼠有两种基因型，一种为10 bp的缺失突变；另一种为22 bp的缺失突变，同时伴有3 bp的插入突变。与野生型小鼠相比，基因突变小鼠心、肝、脾、肺、肾等组织中miRNA－29b1表达量下降明显。结论应用CRISPR／Cas9技术成功构建miRNA－29b1基因敲除小鼠。

关键词：CRISPR/Cas9、miRNA-29b1、基因敲除小鼠

所属期刊栏目：26

分类号：R-33(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金优秀青年基金项目NO．81522009；国家自然科学基金面上项目NO．8137257，81272385；军队重点项目NO．BWS14J058。

在线出版日期：2017-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

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