C57小鼠 LATl 真核表达载体的构建及其对Neuro-2a 细胞的影响

摘要：

目的：构建C57小鼠L型氨基酸转运载体1（ LAT1）的真核表达载体，转染Neuro-2a肿瘤细胞进行表达，探讨LAT1对Neuro-2a细胞增殖及凋亡的影响。方法采用RT-PCR扩增出LAT1全长目的基因，定向克隆pcDNA3.1表达载体，构建pcDNA3.1-LAT1重组表达质粒，通过脂质体法将阳性克隆转染Neuro-2a细胞，经G418筛选获得稳定表达株后，用RT-PCR和western blot 蛋白印迹法检测LAT1的表达情况。通过MTT法检测各组Neuro-2a细胞的增殖情况，并借助流式细胞仪检测LAT1对Neuro-2a细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建小鼠pcDNA3.1-LAT1真核表达载体，酶切和测序证实其序列正确，并成功转染Neuro-2a细胞建立稳定转染细胞系。MTT法显示转染重组质粒pcDNA3.1-LAT1的Neuro-2a细胞增殖速度显著高于对照组（P ＜0.05），且流式细胞术检测转染组对Neuro-2a细胞具有促进增殖抑制凋亡的作用。结论转染 pcDNA3.1-LAT1质粒的Neuro-2a细胞能成功表达LAT1蛋白，且LAT1对Neuro-2a细胞的增殖和凋亡均有显著影响，为进一步研究LAT1的生物学作用奠定了重要基础。

关键词：L型氨基酸转运载体1、真核表达载体、Neuro-2a细胞、增殖、凋亡

分类号：R332(人体生理学)

在线出版日期：2014-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：25-30,9