家兔支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1的原核表达及其间接ELISA方法的建立

摘要：

目的 表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)DNT蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法.方法 参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌dnt基因序列(AB020025)针对其N-端设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段.将PCR扩增产物连接至原核表达载体pET-28a(+)载体中,以E.coli BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白DNT1作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数,建立检测支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNTI抗体的ELISA方法.结果 成功克隆了dntN-端的基因序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白DNT1具有良好的抗原性.应用重组蛋白DNTI为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法.试验确定重组蛋白DNT1抗原的包被浓度为6.25μg/mL,最适血清稀释度为1:100.结论 建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了一种比较实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础.

关键词：兔、支气管败血波氏杆菌、坏死毒素(DNT)、原核表达、间接ELISA

所属期刊栏目：21

分类号：R33(人体生理学)

资助基金：农业部公益性行业科研专项nyhyzx07-040;现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目nycytx-44;江苏省科技支撑计划--农业部分BE2008372

在线出版日期：2011-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：47-51