SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法测定猴免疫缺陷病毒(SIV)前病毒DNA拷贝数方法的建立

摘要：

目的 建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)前病毒DNA.方法 巢式RT-PCR扩增SIVmac251病毒RNA gag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEM T载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒.该质粒经大量扩增纯化后定量,10倍系列稀释后,做出标准曲线,作为SIV前病毒DNA荧光定量检测的外标准品.结果 应用Roche公司FastStart DNA Master SYBR Green Ⅰ Kit,该标准品可精确定量到10 copies/μL.结论 制备的pGEM-SIVgag477质粒外标准品纯度高,SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)前病毒DNA载量.

关键词：猴免疫缺陷病毒、前病毒DNA、实时荧光定量PCR、SYBR Green Ⅰ

所属期刊栏目：16

分类号：R373.51(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：supported by the National Institute of HealthU19 AI51915-04

在线出版日期：2006-11-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：680-683,690