化学发光加强法核酸标记检测系统用于猪DNA指纹分析的研究

摘要：

目的 探讨化学发光加强法(ECL)核酸直接标记和检测系统应用于猪的DNA指纹分析的可行性。方法 采用人源α-珠蛋白3'HVR探针，应用ECL核酸直接标记和检测系统，对西双版纳小耳猪进行了Southern杂交DNA指纹分析，获得了最适实验条件。结果 取10μg基因组DNA于30μl反应体系中，加入HinfⅠ或HaeⅢ内切酶3～5U/μgDNA，酶切消化4h，消化液在50V电压条件下4℃电泳20h，采用真空转移法进行脱嘌呤、碱变性、中和及转膜，时间分别为15min、15min及20min，转膜采用20×SSC真空转移1h至hybondN+尼龙膜上，大大提高了转膜效率。以HRP标记探针进行管中杂交，以化学发光法进行检测，室温放射自显影30min，获得了清晰可辨的DNA指纹图。结论 该方法可用于猪的DNA指纹分析，其效果与同位素标记探针的效果基本一致。

关键词：Southern 杂交、DNA指纹、ECL

所属期刊栏目：11

分类号：Q95-33(动物学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G2000016106;国家科技攻关项目96 —23—06—01;国家自然科学基金39830190;国家自然科学基金39770398

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：15-18