HBV转基因小鼠肝原代细胞分离纯化及其在肝损伤研究中的应用

摘要：

目的 分离鉴定乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠肝原代细胞,为HBV体外相关研究提供有利模型.方法 HBV转基因C57 BL/6小鼠深度麻醉后,通过二步灌注法,首先用不含钙灌注液将肝中的血液冲洗干净,然后用含钙的IV型胶原缓冲液将肝细胞消化下,通过3次低速低温离心法纯化去除杂质,则成功分离提取肝原代细胞.进而通过糖原染色法对提取的细胞进行鉴定,并检测7 d内肝细胞的增殖活力,以及第1天和第3天细胞凋亡情况.最后,将提取的肝细胞应用于过氧化氢诱导肝细胞损伤表型检测,包括细胞内活性氧、线粒体膜电位、多个氧化应激因子转录水平检测和LDH泄露情况.结果(1)分离的HBV小鼠肝原代细胞为典型性肝细胞形态,并呈现糖原阳性染色结果;(2)肝细胞活性检测发现肝细胞贴壁后,活性增强,第5～6天时活性最高,然后逐渐下降;(3)对比肝细胞提取后第1天和第3天的细胞死亡情况,未发生明显自发性死亡;(4)细胞通过过氧化氢诱导后,发现胞内活性氧积聚,线粒体膜电位改变,氧化应激因子转录水平上调,以及乳酸脱氢酶泄露增加.结论 在本实验条件下,成功分离鉴定HBV小鼠肝原代细胞,并应用于肝损伤相关实验.

关键词：原代细胞、二步灌注法、模型、肝损伤

所属期刊栏目：30

分类号：Q95-33(动物学)

资助基金：福建医科大学启航基金项目;福建医科大学启航基金项目

在线出版日期：2022-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：526-532