内皮细胞条件性敲除EMCN小鼠模型建立及肿瘤肺转移对比分析

摘要：

目的 建立内皮细胞条件性敲除EMCN基因小鼠模型,探讨C57BL/6小鼠与内皮细胞条件性敲除EMCN小鼠模型体内肿瘤肺转移存在的差异.方法 将内皮细胞特异性Tek-CreERT2小鼠与EMCNflox/flox小鼠杂交,将子代雄性EMCNflox/wt/Tek-CreERT2+与雌性EMCNflox/flox小鼠交配,取得内皮细胞特异性敲除EMCN基因小鼠(EMCNflox flox/Tek-CreERT2+,EMCNecko).通过在DNA和蛋白水平验证基因敲除准确性及效率,提取小鼠基因组DNA后,PCR扩增检测Tek-CreERT2及FLOX位点,Tamoxifen诱导后,Western Blot检测组织中EMCN蛋白的表达.对正常C57BL/6小鼠与EMCNecko小鼠表型进行观察及脏器HE染色.为了证实EMCN敲除对肿瘤转移的影响,将LLC细胞尾静脉注射C57BL/6与EMCNecko小鼠,2周后解剖取肺检测肺转移情况,并对2组小鼠的肺转移结果统计对比分析.将LLC细胞皮下注射C57BL/6与EMCNecko小鼠,2周后手术切除皮下肿瘤,分别在术后2、3周观察肺转移情况,将两组肺组织进行HE染色,并对两组小鼠的肺转移结果统计对比分析.结果 从DNA和蛋白水平证实EMCNflox/flox/Tek-creERT2+小鼠成功构建.小鼠组织HE切片分析显示基因敲除小鼠脏器发育无异常.尾静脉注射LLC及皮下注射LLC后切除肿瘤的C57BL/6和EMCNecko小鼠均可以发生肺转移,与C57BL/6小鼠相比,内皮细胞EMCN的缺失显著促进了小鼠肺转移.结论 成功获得内皮细胞EMCN条件性敲除小鼠,内皮细胞EMCN敲除小鼠肿瘤肺转移的能力显著优于正常C57BL/6小鼠,预期为肿瘤肺转移动物模型各项研究提供快速发生肺转移的动物模型.

关键词：EMCN基因、内皮细胞、Tek-CreERT2/EMCNflox/flox、肺转移

所属期刊栏目：30

分类号：Q95-33(动物学)

资助基金：国家重点研发计划2021YFF0702801

在线出版日期：2022-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：185-190