利用CRISP R/Cas9技术产生肌肉特异表达Cas9的 小鼠胚胎

摘要：

目的 通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9小鼠动物模型奠定基础.方法 设计小鼠Rosa26位点sgRNA并通过体外酶切验证活性,同时使用同源重组构建肌肉特异性同源打靶载体;通过显微注射将Rosa26 sgRNA与Cas9蛋白注射到小鼠胚胎,通过PCR及测序检测胚胎的编辑情况,同时移植到假孕母鼠体内,待其生产;将同源打靶载体与Rosa26 sgRNA和Cas9一起注射到小鼠胚胎,通过PCR检测整合情况.结果 体外酶切实验表明,体外转录的sgRNA与Cas9蛋白联合可对靶位点产生编辑作用;成功构建了肌肉特异性同源打靶载体Donor-SP-px459;通过原核注射获得Rosa26基因编辑胚胎,经移植获得Rosa26基因编辑小鼠;注射同源打靶载体后,成功获得肌肉特异表达Cas9蛋白的基因打靶小鼠胚胎.结论 利用CRISPR/Cas9技术,成功获得Rosa26基因编辑胚胎和小鼠,并获得了肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为利用基因打靶构建肌肉特异表达Cas9的小鼠动物模型奠定基础.

关键词：Rosa26、Cas9、基因编辑、肌肉特异、基因打靶

所属期刊栏目：27

分类号：Q95-33(动物学)

资助基金：中央高校基本科研业务费专项C类项目资金资助2572016CA10;黑龙江省自然科学基金项目C2016012

在线出版日期：2019-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：271-277