一种 gRNA 快速合成及检测方法的建立

摘要：

目的：建立一种gRNA快速合成及检测的方法。方法设计引物并利用PCR技术迅速扩增gRNA的DNA模板片段，然后通过体外转录纯化得到gRNA；最后通过体外反应迅速对gRNA和Cas9酶切效率及特异性进行检测。结果体外合成的gRNA特异性强，活性高，在靶点上成功切开DNA双链。结论成功建立gRNA快速合成及检测的方法，为后续转染或显微注射筛选有活性gRNA节约了时间。

关键词：CRISPR/Cas9、PCR扩增、体外转录、体外检测

分类号：Q95-33(动物学)

资助基金：国家高技术研究发展863计划2012AA022403；协和青年创新基金33320140150；国家重点基础研究发展973计划2013CB945001。

在线出版日期：2015-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：267-271,290