恒河猴外周血单核巨噬细胞体外培养方法的建立

摘要：

目的 建立一种简单、经济、高效的培养恒河猴外周血单核巨噬细胞(monocyte-derived macrophage,MDM)的方法.方法 用肝素钠抗凝管采集成年恒河猴(Macaca mulatta)全血,密度梯度离心法分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs).同时用无抗凝剂采血管采集同一只猴外周血,自凝后分离血清.将猴PBMCs置于CellBIND Surface的96孔(0.8 ×106个细胞/孔)或48孔培养板(3 × 106个细胞/孔)中,用含不同百分比的猴自体血清或胎牛血清(fetal calf serum,FCS)的RPMI 1640培养液培养24 h后洗弃未贴壁细胞,加入含有猴自体血清或FCS的新鲜培养基继续培养7d后观察细胞形态学.分化良好的猴单核巨噬细胞贴壁能力强,占据板底大部分区域.胞体形态多样,多数呈长梭形.用巨噬细胞标记受体(CD14)抗体染色判断细胞纯度.并用细菌内毒素(LPS)刺激分化的巨噬细胞,检测巨噬细胞炎性因子的表达.此外,用猴艾滋病毒(SIVmac17E-Br、SIV-mac251)和人-猴嵌合体艾滋病毒(SHIV KU-1)感染分化良好的猴巨噬细胞,检测病毒在猴巨噬细胞中的复制.结果 在含2％猴自体血清的RPMI 1640培养条件下,大多数(＞85％)猴单核细胞能在24 h内贴壁,体外分化5-7d后,猴巨噬细胞纯度大于96％.相比而言,含较高浓度(4％,8％或10％)猴自体血清或FCS的RPMI 1640培养基对猴单核细胞的贴壁和分化作用较差.分化良好的猴巨噬细胞对LPS刺激敏感,可产生多种巨噬细胞炎性因子.此外,这些细胞对SIV或SHIV均易感,产生感染性病毒.结论 含2％猴自体血清的RPMI 1640培养基适于原代猴单核细胞的贴壁和分化.该方法简单、花费少,无需生长因子,且分化效果好,是培养猴艾滋病毒及开展相关免疫学实验的重要手段.

关键词：恒河猴、艾滋病毒、单核细胞、巨噬细胞

所属期刊栏目：23

分类号：Q95-33(动物学)

资助基金：国家自然科学基金81271334,81201261,81301428;博士后科学基金2013M531745

在线出版日期：2015-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：18-24