raldh2基因阻抑导致斑马鱼心脏发育畸形的机制

摘要：

目的 通过显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸(MO)阻抑视黄醛脱氢酶2(raldh2)基因表达,探讨raldh2基因阻抑对斑马鱼胚胎心脏发育的影响及可能的分子机制.方法 根据斑马鱼raldh2基因起始密码区域序列设计合成吗啡啉修饰的反义寡核苷酸,采用显微注射方法阻抑斑马鱼胚胎raldh2基因表达.构建raldh2-EGFP重组质粒进一步验证MO的特异性和有效性.分析raldh2基因阻抑后对胚胎发育,尤其心脏表型和功能的影响.通过胚胎整体原位杂交,分析心脏相关nppa和tbx20基因表达模式以及raldh2阻抑后对其表达的影响.结果显微注射raldh2-MO能有效地特异地阻抑斑马鱼胚胎raldh2基因表达,raldh2-MO对胚胎发育影响呈剂量依赖性.raldh2基因阻抑可导致胚胎心脏发育畸形,干扰正常的房室分化和向右环化,导致房室瓣血液反流.与野生型胚胎比较,raldh2基因阻抑组胚胎心率和心室收缩分数降低(P＜0.05),心功能受损.整体原位杂交结果显示raldh2基因阻抑后nppa基因表达改变,心室部位nppa表达清晰,而心房部位表达减弱.tbx20基因在心脏、运动神经元、顶盖及视网膜表达,raldh2基因阻抑后,tbx20表达下调,在心脏表达减弱,以心房和流出道部位更显著.结论raldh2基因在心脏早期发育的多个环节发挥重要作用,影响房室分化、心管环化和心肌收缩等.在心脏发育过程中nppa和tbx20基因表达受到raldh2基因调控,可能参与RA信号缺乏导致心脏畸形的潜在分子机制.

关键词：视黄醛脱氢酶2、基因阻抑、斑马鱼、心脏发育

所属期刊栏目：19

分类号：Q95-33(动物学)

资助基金：上海市科学技术委员会科研计划项目054119512;儿科医院院级基金项目08QN-02

在线出版日期：2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：331-335