人脐带间充质干细胞作为维持人胚胎干细胞生长饲养层细胞的研究

摘要：

目的 寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题.方法 尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长状态.用胶原酶消化法分离人脐带间充质干细胞,光镜下观察细胞形态；流式细胞仪检测其表面标志；诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞和脂肪细胞进行分化.将人胚胎干细胞系H1接种于丝裂霉素C灭活后的人脐带间充质干细胞上,每隔5d进行一次传代.培养20代后,对人胚胎干细胞特性进行相关检测,包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因的表达、分化能力.结果 从人脐带中分离出的间充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长；细胞高表达CD44、CD29、CD73、CD105、CD90、CD86、CD147、CD117,不表达CD14、CD38、CD133、CD34、CD45、HLA-DR；具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的潜能.人胚胎干细胞在人脐带间充质干细胞饲养层上培养20代后,继续保持人胚胎干细胞的典型形态,碱性磷酸酶染色为阳性,免疫荧光染色显示OCT4、Nanog、SSEA4、TRA-1-81、TRA-1-60的表达为阳性,SSEA1表达为阴性,体外悬浮培养可以形成拟胚体.结论 人脐带间充质干细胞可以作为人胚胎干细胞的饲养层细胞,支持其生长,并维持其未分化生长状态.

关键词：人胚胎干细胞、小鼠胚胎成纤维细胞、人脐带间充质干细胞、饲养层细胞、临床应用

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分类号：Q95-33(动物学)

资助基金：国家自然科学基金30772376;北医三院临床重点项目基金BYSY200903;教育部高等学校博士学科点专项科研基金20100001120100

在线出版日期：2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：271-276