五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库的构建与鉴定

摘要：

目的 运用SMART 技术,构建了五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库.方法 用RNAiso reagent(TaKaRa)处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜) 制备总RNA.用Powerscript TM 反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,Sfi I酶切和CHROMA SPIN-400TM柱分离后,500 bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入E.coli.DH5α,建成原始文库.然后,扩增文库并随机挑取单菌落,PCR鉴定重组子插入片段大小.结果 经鉴定,库容量达到1.5×106克隆,原始文库滴度为9.7×109 cfu/mL,扩增后的文库滴度为6.4 ×1010 cfu/mL.重组率接近100%,插入片段大小为0.5～2 kb,平均长度约为1.1 kb.结论 构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库符合建库要求,可以用于全长cDNA 的筛选.为五指山小型猪新基因的获得及结构和功能研究提供了可靠材料.

关键词：五指山小型猪、外周血白细胞、cDNA文库、构建、鉴定

所属期刊栏目：17

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目30560021;海南省教育厅高校科研项目Hj200804

在线出版日期：2009-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：222-226