潮霉素抗性3T3细胞的建立和鉴定

摘要：

目的建立具有潮霉素(hygromycin)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE-Ins-human)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层.方法通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因的质粒pHyg导入3T3细胞中,利用潮霉素的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR鉴定.结果经500 μg/ml的潮霉素压力筛选后,获得了抗性细胞克隆.抗性3T3细胞的形态和生长速度与正常3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出对应的核苷酸片段.结论成功地培育了潮霉素抗性的3T3细胞,为进行目的基因(pTRE-Ins-human)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选奠定了基础.

关键词：3T3 细胞、潮霉素、饲养层、ES细胞

所属期刊栏目：12

分类号：Q813(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金30070353

在线出版日期：2005-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：163-165