定量测定黑鲷生长激素受体mRNA的液相杂交/RNase保护法

摘要：

目的建立液相杂交/核糖核酸酶保护测定(Ribonuclease Protection Assay, RPA)技术定量检测黑鲷(Sparus macrocephalus)生长激素受体mRNA水平. 方法将黑鲷生长激素受体cDNA片断亚克隆至pGEM-T载体,制备特异性的放射性反义RNA探针及正义RNA,将反义RNA探针与正义RNA及样品总RNA进行液相杂交,用RNase A和RNase T1降解杂交产物的单链RNA,双链杂交体得到保护,然后检测杂交体的分子大小及放射强度. 结果检测出了黑鲷生长激素受体反义RNA探针与正义RNA及样品总RNA的特异性杂交片断,由此建立了定量测定黑鲷生长激素受体mRNA的液相杂交/RNase保护法,并采用该方法在黑鲷的多种组织中检测出了生长激素受体基因的表达,表达水平在肝脏中最高.该结果与我们曾采用生长激素放射受体分析法对黑鲷生长激素受体所研究的结果相吻合. 结论为进一步深入研究鱼类生长激素受体分子内分泌的调控理论提供了有力手段.

关键词：黑鲷、受体、促生长素、核糖核酸酶保护测定

所属期刊栏目：11

分类号：R394-33

资助基金：国家自然科学基金39970586;国家"211"工程建设项目

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：7-11