人载脂蛋白E7转基因小鼠肾脏cDNA削减文库与cDNA文库

摘要：

目的以人apoE7基因制备的高脂血症转基因小鼠模型已建成,要用于探查这一突变基因致病的分子机制,首先揭示人apoE7在小鼠体内诱发了那些基因的表达异常,是重要的环节之一.cDNA削减文库是寻找异常高表达的已知和未知基因有效的手段,而cDNA文库更是获取全长基因所必须.方法自正常小鼠与转基因小鼠肾脏同时提取总RNA,再分离mRNA,逆转录制备cDNA后,用两次分子杂交削除转基因鼠cDNA中与正常小鼠相同的部分,再用PCR与择需PCR法扩增转基因鼠特异的基因,克隆入pGEM-T载体后,制备削减文库.未经削减的转基因小鼠cDNA克隆入λgt11载体,制备基因表达文库.结果和结论自高脂血症转基因小鼠肾脏构建的削减文库得到约400个削减克隆,测定了部分克隆的序列,并进行同源性比较.λgt11/cDNA文库滴度1.7×107 pfu/ml,随机测定的克隆其插入片段长约500bp以上.

关键词：杂交、聚合酶链反应、文库

所属期刊栏目：10

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家攀登计划

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：86-90