ELP30-intein标签在重组脂蛋白相关磷脂酶A2原核表达中的作用

摘要：

目的 探讨ELP30-intein标签在重组脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PL A2)原核表达过程中的作用.方法 将重组质粒pIG6-ELP30-intein-LP-PL A2转化至感受态E.coli W3110中,以不携带ELP30-intein标签的重组质粒pIG6-LP-PL A2为阴性对照,对不同温度(20、25、30℃)及诱导方式(IPTG及自动诱导)下重组ELP30-intein-LP-PL A2的质周腔表达情况进行Western blot分析.采用基于类弹性蛋白(elastin-like polypeptide,ELP)标签的可逆相变循环(inverse transition cycling,ITC)技术纯化并分离目的蛋白,进行SDS-PAGE及Western blot检测.结果 不携带ELP30-intein标签的LP-PLA2重组蛋白仅于胞内表达,无法定位于质周腔.在相同诱导温度条件下,自动培养基诱导表达获得的目标蛋白量远低于IPTG诱导表达.与20 ℃比较,IPTG诱导温度为25及30 ℃时,目标蛋白总体表达水平有所提升.采用ITC技术成功分离纯化目标蛋白ELP30-intein-LP-PL A2,通过诱导内含肽自身剪切获得了LP-PL A2重组蛋白,纯度为70％,且可与抗LP-PL A2抗体发生特异性结合.结论 ELP30-intein标签可促进重组蛋白LP-PLA2在E.coli质周腔内的表达,且通过非色谱纯化技术分离获得的LP-PL A2重组蛋白纯度为70％,为快速、低成本有效生产LP-PL A2重组蛋白提供了新方法.

关键词：脂蛋白相关磷脂酶A2、类弹性蛋白、原核表达

所属期刊栏目：36

分类号：Q74(生物小分子的结构和功能)

资助基金：陕西省自然科学基金;西安市创新能力强基计划-医学研究项目

在线出版日期：2023-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1080-1084,1096