重组人血清白蛋白在CHO细胞中的高效表达及其培养工艺优化

摘要：

目的 在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中高效表达人血清白蛋白(human serum albumin,HSA),并优化其培养工艺,为HSA的规模化生产奠定基础.方法 利用基因重组技术构建HSA的真核表达载体,并将其电转染至全悬浮CHO细胞中,利用G418及有限稀释法筛选获得可稳定高表达HSA的单克隆细胞株,通过在基础培养基中添加葡萄糖、丁酸钠及补料培养基等方式进行细胞培养工艺优化,以提高HSA表达量;最终在5 L生物反应器上进行放大培养验证.结果 成功构建了重组表达质粒pcDNA3.1-HSA,并在全悬浮CHO细胞中实现分泌表达后,又经过2次单克隆筛选,获得高表达HSA的2次单克隆细胞株CHO-rHSA-7H2A9和CHO-rHSA-7H2D12,表达量分别达到29.37和25.26 mg/L;通过培养工艺优化使HSA表达量达到100.00 mg/L左右;最终使5 L生物反应器上HSA表达量提升至166.16mg/L,与第1次单克隆细胞上清中HSA表达量相比,提高了30倍左右.结论 实现了HSA在CHO细胞中的高效表达,为进一步在生物制品领域规模化生产HSA及解决市场供应问题奠定了基础.

关键词：重组人血清白蛋白、CHO细胞、高效表达

所属期刊栏目：36

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家民族事务委员会中青年英才培养计划;兰州市人才创新创业项目

在线出版日期：2023-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1054-1061,1071