一种真核表达的抗H5N1-M1入胞单分子抗体的生物活性评价

摘要：

目的 评价一种真核表达的抗H5N1-M1入胞单分子抗体(TAT-ScFv-mFc)的生物活性.方法 采用Western blot法及局域表面等离子共振技术(localized surface plasmon resonance,LSPR)分别检测TAT-ScFv-mFc与H5N1-M1蛋白的免疫结合活性及亲和力;CCK-8法检测TAT-ScFv-mFc对流感病毒H1N1的抑制作用;免疫荧光法检测TAT-ScFv-mFc对MDCK细胞的穿膜能力.雌性BALB/c小鼠尾静脉注射TAT-ScFv-mFc,200μL/只,共30只,于注射后5、60、120、240及360 min,断尾采血,分离血清,ELISA法检测血清效价,根据Origin 2021软件绘制的半衰期曲线计算半衰期.结果 TAT-ScFv-mFc与H5N1-M1蛋白可发生特异性结合,结合数率常数(Ka)达6.67× 104[1/(M*s)].经H1N1感染的MDCK细胞的存活率随着TAT-ScFv-mFc浓度增加而逐渐升高,且呈剂量依赖性,对H1N1的复制有明显抑制作用.TAT-ScFv-mFc可在短时间内穿过MDCK细胞膜,进入细胞内,结合病毒M1蛋白,从而抑制病毒的复制和组装.TAT-ScFv-mFc在小鼠体内的半衰期为212min.结论 TAT-ScFv-mFc具有与H5N1-M1良好的免疫结合活性及亲和力,可有效抑制H1N1的复制,对MDCK细胞膜有良好的穿透能力,且在小鼠体内半衰期较长,为H5N1感染的药物治疗、疫苗研究、预防治疗奠定了基础.

关键词：流感病毒H5N1、M1蛋白、单分子抗体、真核表达、生物活性

所属期刊栏目：36

分类号：S852.4+3(动物医学（兽医学）)

资助基金：吉林省重点研发计划;军队后勤重大专项

在线出版日期：2023-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1047-1053