卵清蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证
目的 建立卵清蛋白(ovalbumin,OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证,以用于流感疫苗中OVA含量的测定.方法 以兔抗OVA多克隆抗体作为包被抗体,HRP标记的兔抗OVA多克隆抗体作为检测抗体建立OVA双抗体夹心ELISA检测方法.对包被抗体浓度(2、1、0.5、0.25μg/mL)、酶标抗体浓度(0.5、0.25、0.125pg/mL)、封闭液(1%BSA、2%BSA、1%BSA+1%蔗糖、2%BSA+2%蔗糖,以未封闭为对照)进行优化,并确定Cut-off值作为判断标准.对方法的线性范围及检测下限、特异性、重复性和准确度进行验证.结果 该方法的最适检测条件为:包被抗体浓度1 μg/mL,酶标抗体浓度0.25μg/mL;封闭液为2%BSA+2%蔗糖;Cut-off值为0.051 66.该方法线性范围为5-0.313 ng/mL,检测下限为0.078 ng/mL;与流感病毒、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、Vero细胞上清液等均不发生反应;板内变异系数(CV)在2.562%-13.887%之间,板间CV在4.000%-16.497%之间;该方法检测结果与德国SERAMUN OVA定量检测试剂盒检测结果的符合率在93.79%-107.05%之间.结论 建立的OVA双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性、重复性、线性范围及准确度,且操作简便、成本低,可用于OVA的定量检测.
卵清蛋白、鸡胚、双抗体夹心ELISA
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R392.1
国家自然科学基金;中国医学科学院医学与健康科技创新工程;中国医学科学院医学科技创新项目
2023-08-09(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
850-854,861