重组蛋白中甘氨酸、组氨酸含量柱前衍生反相高效液相色谱检测方法的建立及验证
目的 建立定量检测重组蛋白中甘氨酸、组氨酸含量的柱前衍生反相高效液相色谱法(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC),并进行验证.方法 选用 AccQ Tag-C18(3.9 mm × 150 mm,4 μm)色谱柱,以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(6-aminoquinolyl-N-hydroxysccinimidyl carbamate,AQC)为柱前衍生化试剂,α-氨基丁酸为内标,AccQTag Eluent A液、乙腈溶液、超纯水为流动相,紫外检测波长为248 nm,进样量为10 μL,流速为1.0mL/min,柱温为37℃.内标法计算样品中甘氨酸、组氨酸含量,并对该方法专属性、线性、检测限、定量限、精密度、准确度和稳定性进行验证.结果 建立的方法可将甘氨酸、组氨酸和内标α-氨基丁酸有效分离,专属性强.甘氨酸在2.25～11.25μg/mL范围内,组氨酸在72.85～364.24μg/mL范围内,标准曲线线性良好,R2均＞0.99.检测限为:甘氨酸2.25μg/mL,组氨酸18.21 μg/mL.定量限为:甘氨酸4.69 μg/mL,组氨酸32.86 μg/mL.甘氨酸、组氨酸同浓度6份样品重复性验证结果的RSD分别为4.6％和5.0％,中间精密度试验回收率的RSD分别为6.9％和2.0％.甘氨酸含量接近定量限,其高、中、低浓度样品平均回收率为75.9％～111.7％;组氨酸回收率为88.9％～97.3％.同1份样品在0、12、18、24、30、48h甘氨酸含量的RSD为7.7％,组氨酸含量的RSD为3.3％.结论 柱前衍生RP-HPLC法精密度高,结果准确可靠,可对重组蛋白中的甘氨酸、组氨酸含量进行质量控制.
柱前衍生-反相高效液相色谱法、甘氨酸、组氨酸、含量
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O657.7+2(分析化学)
河北省科技重大专项21282401Z
2023-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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