肠道出血性大肠埃希菌菌株及其基因组DNA标准物质的研制及评价
目的 筛选肠道致病性大肠埃希氏菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)菌株,并将其申报为中国医学细菌保藏管理中心(China Medical Bacterial Species Conservation and Management Center,CMCC)标准菌株;以此标准菌株研制我国自主知识产权的EHEC菌株及其基因组DNA标准物质,并将其申报为国家药品标准物质.方法 依据GB4789.6-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》,从160株来源于腹泻患者的大肠埃希菌中筛选EHEC菌株,按照CMCC菌株管理规定整理材料将其申报为标准菌株.用其制备EHEC菌液及其基因组DNA溶液,采用冷冻干燥技术分别制备菌株类(103CFU/样品)和基因组DNA类(20ng/样品)样品各600个.将这两种样品各随机抽取20个进行均匀性检验;并分别于25、37℃条件下存放1、3、5、7 d取样检测运输稳定性,于4 ℃条件下存放7、14、28 d取样检测短期保存稳定性,于-20℃条件下存放14、28、60 d取样检测长期保存稳定性.组织3家实验室对两种样品进行协同标定.筛选20种食品基质对菌株样品进行使用效果评价.结果 从160株来源于患者的大肠埃希菌中筛选出1株EHEC菌株,最终申报为CMCC(B)43207标准菌株.均匀性检验中,F菌株样品=0.662＜FINV(0.05,19,20),P＞0.05;20个基因组样品的eae、stx1、stx2基因均为阳性.于25和37 ℃保存7 d、-20 ℃保存60 d、4 ℃保存28 d后,菌株样品活菌含量均为103CFU/样品,基因组样品的eae、stx1、stx2基因均为阳性.随机抽取的EHEC菌株和基因组DNA样品经3家实验室鉴定均为EHEC,活菌含量均在103CFU/样品的水平,且eae、stx1、stx2基因均为阳性.在20种食品基质中加入样品后均可检出,本底对照均未检出.EHEC菌株及其基因组DNA样品均纳入我国药品标准物质,编号分别为80024和80056.结论 研制的具有自主知识产权的EHEC菌株及其基因组DNA标准物质可提高EHEC检验的时效性,弥补了我国此方面空白.
微生物标准物质、肠道致病性大肠埃希菌、基因组DNA
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Q939.9(微生物学)
国家重点研发计划2018YFC1604303
2023-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
833-838
