人生长激素Fc融合蛋白电荷异质性全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析方法的建立及验证
目的 建立全柱成像毛细管等电聚焦电泳(image capillary isoelectric focusing,iCIEF)方法分析重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)Fc融合蛋白(Fc-rhGH)的电荷异质性,并对方法进行验证.方法 通过对目标蛋白浓度、助溶剂(尿素)浓度、聚焦时间的优化建立Fc-rhGH的iCIEF分析方法.采用该方法与传统平板等电聚焦电泳(isoelectric focusing,IEF)同时分析目标蛋白,并比较分析结果;对建立的方法进行特异性、准确性、精密性、定量限(limit of quantitation,LOQ)、耐用性验证.结果 优化后的方法为采用8 mol/L尿素、0.35％甲基纤维素(methyl cellulose,MC)、4％两性电解质、0.5％等电点标记物混合溶液为样品缓冲液,聚焦条件为:1 500 V 1 min,3 000 V 5.5 min.IEF不适用于分析Fc-rhGH原液的电荷异质性.采用优化的iCIEF进行分析,目标蛋白能明显区别于非相关蛋白,且空白试剂基线平稳;准确性验证回收率在90％～110％之间,线性范围为0.25～0.75 mg/mL(目标上样量的50％～150％);重复性验证中各异构体pI 的RSD均小于0.3％,峰面积百分比RSD均小于5％;定量限为0.04 mg/mL;方法的样品保存时间耐用性、两性电解质pharmalyte 3-10耐用性和MC耐用性良好.采用该方法分析Fc-rhGH理化对照品的电荷异质性,可有效分离对照品的8个电荷异质体,pI范围在5.9～6.4.结论 建立的iCIEF法具有良好的特异性、准确性、精密性、耐用性,比传统平板IEF更适合高效分析Fc-rhGH的电荷异质性,对Fc-rhGH及其他Fc融合蛋白的质量控制具有重要意义.
全柱成像毛细管等电聚焦电泳、重组人生长激素Fc融合蛋白、电荷异质性
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R977.1(药品)
吉林省科技发展计划项目20160204034YY
2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
700-706,713
