报告基因法检测人生长激素生物学活性
目的 建立报告基因法(reporter gene assay,RGA)检测人生长激素(human growth hormone,hGH)的生物学活性,并对方法进行验证.方法 通过hGH能与HEK293/GH-Luc细胞膜上的hGH受体(hGH receptor,hGHR)结合激活荧光素酶(luciferase,Luc)的表达评价hGH的生物学活性.建立的方法检测条件为:样品起始浓度1 μg/mL;细胞接种量为(2.45～2.66)×104个/孔;样品3倍系列稀释,共8个稀释度;孵育时间为18～24h.通过测定Luc强度,并经四-参数拟合与国家标准品进行比较计算样品的相对生物学活性.对建立的方法进行专属性、重复性、中间精密度、相对准确度、线性范围、耐用性验证.结果 产品中辅料成分及培养基中血清成分不会对活性检测结果产生影响;1批样品重复检测6次相对效价的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)为6.794％,远低于20％;2名实验员不同时间对不同批次样品检测的相对效价GCV均低于20％;不同浓度供试品相对效价测定值的相对偏差均在±12％范围内,线性回归方程的斜率为0.982,线性范围为0.6～1.6 μg/mL,决定系数(R2)为0.997;3批原液及1批成品在不同细胞代次、细胞密度及加样位置的条件下,相对效价测定值的GCV分别为4.758％、4.430％、7.294％和2.771％,均小于20％.结论 建立的RGA法专属性、重复性、中间精密度、相对准确度、线性范围和耐用性良好,均符合应用要求,有望替代传统体内生物学活性检测方法,用于hGH的活性评价及质量控制.
人生长激素、报告基因法、荧光素酶、生物学活性
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Q331(人工选择与自然选择)
吉林省科技厅重点科技攻关项目20160204034YY
2023-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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594-598
