融合蛋白ABD-Fc-IL-2的真核表达及其生物学活性鉴定
目的 真核表达融合蛋白ABD-Fc-IL-2,并检测其生物学活性.方法 通过直接PCR及重叠延伸PCR法扩增目的基因SP-ABD-Fc-IL-2,连接至载体pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1/SP-ABD-Fc-IL-2.将重组质粒转染CHO-S细胞表达融合蛋白ABD-Fc-IL-2,并进行Protein A beads亲和层析纯化.Western blot法检测纯化融合蛋白的特异性,CTLL-2/MTT细胞增殖比色法测定其生物学活性,pull down/Western blot法检测融合蛋白中链球菌蛋白G的白蛋白结合结构域(albumin-binding domain,ABD)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的相互作用.结果 重组质粒pcDNA3.1/SP-ABD-Fc-IL-2经双酶切及测序鉴定,证明构建正确.纯化融合蛋白ABD-Fc-IL-2纯度达90%,可与鼠抗IL-2单克隆抗体发生特异性结合,生物学活性为3.29×108 IU/mL,融合蛋白中ABD与HSA可相互结合.结论 真核表达的融合蛋白ABD-Fc-IL-2具有较高的生物学活性,可促进CTLL-2细胞增殖,且保持了 ABD片段与HSA结合的能力.
融合蛋白ABD-Fc-IL-2、基因重组、真核表达、生物学活性
36
R34(人体生物化学、分子生物学)
山西省自然科学基金201801D121313
2023-05-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
406-410,418