靶向小鼠Tsc1和Tsc2基因的CRISPR/Cas9系统的构建及其打靶效力验证
目的 设计并构建靶向Tsc1和Tsc2基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,并在细胞水平验证基因编辑效力.方法 针对小鼠Tsc1和Tsc2基因分别设计3个sgRNA导向序列,构建sgRNA表达载体,与Cas9表达质粒共转染小鼠N2a细胞,经药物筛选获得阳性细胞后,PCR扩增打靶位点的DNA片段,利用TA克隆测序验证打靶效率.结果 Tsc1基因Tsc1-M-sgRNA2、Tsc1-M-sgRNA3及 Tsc2基因 Tsc2-M-sgRNA1、Tsc2-M-sgRNA2、Tsc2-M-sgRNA3这5个靶点均发生基因编辑,编辑效率分别为40%、80%、30%、30%和20%.结论 成功构建了有编辑效力的靶向小鼠Tsc1和Tsc2基因的CRISPR-Cas9基因编辑系统.
CRISPR/Cas9系统、基因编辑、结节性硬化症、Tsc1、Tsc2
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R394.2
国家自然科学基金;国家自然科学基金;广西自然科学基金项目;广西科技基地和人才专项
2023-05-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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400-405