人鸟苷酸结合蛋白5基因启动子核心调控区域的鉴定及其转录活性分析
目的 构建人鸟苷酸结合蛋白5(guanylate binding protein 5,GBP5)基因启动子不同长度截短片段的荧光素酶报告基因质粒,通过分析启动子不同截短片段的转录活性,确定其核心调控区域.方法 PCR扩增GBP5基因启动子序列,将启动子序列截短为5个不同长度的片段,连接至载体pGL3-basic,构建重组质粒pGL3-GBP5-11/21/31/41/51.将各重组质粒转染至293FT细胞,检测荧光素酶活性;利用JASPAR软件预测GBP5启动子区域的转录因子结合位点,依据预测结果选取靶向核心调控区域的阴阳转录因子1(Yin-Yang transcription factor 1,YY1)进行转录调控活性验证;PCR 扩增 YY1 的 CDS 序列,构建过表达质粒 pIRES2-EGFP-YY1;将 pIRES2-EGFP-YY1、pGL3-GBP5-21(-1 623～+47 bp)质粒与内参质粒pRL-CMV共转染至293FT细胞,检测荧光素酶活性,分析转录因子YY1对GBP5启动子活性的调控作用.结果 菌落PCR、双酶切鉴定证明人GBP5基因启动子报告基因质粒构建正确;JASPAR软件预测GBP5启动子区域存在STAT1、YY1、Foxp3等多个转录因子结合位点;双荧光素酶活性检测结果显示,pGL3-GBP5-21(-1 623～+47 bp)启动子活性最高,而pGL3-GBP5-41(-520～+47 bp)启动子活性明显降低,提示GBP5启动子核心区域位于5'UTR上游-1 623～-520bp区域;过表达YY1能明显激活GBP5启动子活性,调控GBP5表达.结论 人GBP5基因启动子的核心调控区域位于GBP5启动子5'UTR上游-1 623～-520 bp区域,该区域存在转录因子YY1结合位点,YY1过表达能显著影响GBP5启动子活性.
鸟苷酸结合蛋白5、启动子、荧光素酶报告基因、阴阳转录因子1
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R34(人体生物化学、分子生物学)
四川省科技厅项目;四川省科技厅项目;四川省发育与再生重点实验室开放项目;国家级大学生创新创业训练计划项目;国家级大学生创新创业训练计划项目
2023-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
138-144
