利用单个B细胞制备人源SARS-CoV-2刺突蛋白单克隆抗体
目的 利用单个B细胞制备人源严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)刺突蛋白(S蛋白)单克隆抗体,并检测其中和活性.方法 采集经2次SARS-CoV-2灭活疫苗(Vero细胞)免疫,且抗体水平较高的人静脉血,用人外周血淋巴细胞分离液分离外周血单核细胞(peripheral blood mono-nuclear cell,PBMC),经偶联S蛋白的磁珠分选表达S蛋白抗体的单个B细胞.将单个B细胞反转录后,用套式PCR法扩增IgG重链、轻链可变区基因;通过重叠PCR法将可变区基因与CMV启动子及IgGleader序列DNA片段、IgG恒定区及PolyA序列DNA片段连接,构建抗体线性表达盒.将同一 B细胞的重链、轻链线性表达盒转染HEK293T细胞,表达人源SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体.免疫荧光法检测抗体免疫反应活性,假病毒中和试验检测抗体中和活性.结果 共表达了 26株SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体,经Western blot检测,于相对分子质量约55 000和25 000处可见IgG抗体重链、轻链的蛋白条带.表达的单克隆抗体具有S蛋白特异性抗体免疫反应活性.26株单克隆抗体中,20株具有中和活性,抗体半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentrations,IC50)在0.040～0.545 μg/mL之间.结论 制备的人源SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体具有较高的中和活性,有望应用于新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019,COVID-19))治疗药物和检测试剂的研发.
严重急性呼吸综合征冠状病毒2、单个B细胞、单克隆抗体、S蛋白
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TQ464.7
国家自然科学基金;沈阳市社会治理科技专项
2023-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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