结核分枝杆菌H37Rv株PE_PGRS35蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析
目的 克隆结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)PE_PGRS35基因,构建pET28a-PE_PGRS35重组表达载体,异源表达并纯化MTB H37Rv的PE_PGRS35蛋白,经生物信息学分析后,探讨抗MTB新型靶点.方法 PCR扩增PE_PGRS35编码基因,利用重组克隆技术,构建表达载体pET28a-PE_PGRS35,测序鉴定成功后转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,加入异丙基-β-D半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.用Ni柱亲和层析纯化PE_PGRS35蛋白,并对其进行生物信息学分析.结果 经测序证明pET28a-PE_PGRS35表达载体构建正确,表达的PE_PGRS35蛋白相对分子质量约53 000,主要以包涵体形式存在,纯度达90％.生物信息学分析表明,PE_PGRS35蛋白为酸性不稳定性蛋白,主要二级结构为β-折叠和无规则卷曲,无跨膜区,推测为膜外蛋白,有39个磷酸化位点和2个保守结构域,有 Rv1769、PPE8、PPE64、PPE54、PPE24、PPE16、PPE35、PPE6、PPE28、PE2共10个蛋白与PE_PGRS35蛋白相互作用.结论 成功获得高纯度的PE_PGRS35蛋白,为进一步开发抗MTB药物新型靶点提供了参考.
结核分枝杆菌、PE_PGRS35蛋白、原核表达、生物信息学分析
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R392
安徽省自然科学基金;安徽省自然科学基金
2023-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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32-38
