产气荚膜梭菌毒素β1的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立
目的 原核表达产气荚膜梭菌毒素β1(Clostridiumperfringens Beta1 toxin,CPB1),建立该毒素抗体的间接ELISA检测方法.方法 利用基因工程技术获得cpb1基因,克隆至载体pET32a,构建重组质粒pET32α-cpb1,转化感受态E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CPB1.以重组蛋白CPB1作为包被抗原,HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗,建立CPB1抗体的间接ELISA检测法.并以CPB1的单克隆抗体McAb 1K19为一抗,优化包被蛋白的包被浓度、一抗稀释度、封闭时间及二抗稀释度,确定方法的临界值,验证方法的特异性、精密性、灵敏性.采用建立的方法检测201份正常牛血清样品及阴性、阳性小鼠血清样品.结果 表达的重组蛋白CPB1相对分子质量约为54 000(CPB1蛋白与硫氧化还原蛋白的融合蛋白),主要以包涵体形式表达.包被蛋白最佳浓度为10 μg/mL,一抗最佳稀释度为1:16384,最佳封闭时间为120 min,二抗最佳稀释度为1∶1 000.除B和C型产气荚膜梭菌(Clostridiumnperfringens,C.p.)外,其他常见食源性致病菌A450均低于0.3;批内及批间精密性CV均＜10％;当McAb 1K19稀释度为1:32 768,即浓度为0.002 μg/μL时,A450为0.223 5,P/N为10.2.201份正常牛血清及阴性小鼠血清均为阴性,阳性小鼠血清为阳性,检测符合率为100％.结论 制备的重组蛋白CPB1可用于建立CPB1抗体的间接ELISA检测法,建立的方法具有良好的精密性及较高的灵敏性,可用于大量临床样品的检测.
产气荚膜梭菌毒素β1、基因重组、原核表达、间接ELISA法、单克隆抗体
35
S852.61(动物医学（兽医学）)
国家自然科学基金;宁夏回族自治区重点研发计划;宁夏自然科学基金项目;宁夏自然科学基金项目
2023-02-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
1488-1494
