基于噬菌体抗体库技术制备诺如病毒全人源单链抗体

摘要：

目的 基于噬菌体抗体库技术制备抗诺如病毒(norovirus,NoV)全人源单链抗体(single-chain antibody frag-ment,scFv).方法 从G Ⅱ.6 NoV感染者恢复期外周血中分离得到外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),提取总RNA,RT-PCR法分别扩增scFv的重链和轻链可变区基因片段,通过OverlapPCR技术将两者随机拼接成scFv基因片段.将scFv基因克隆至噬菌体质粒pCANTAB-5E,转化至感受态E.coliTG1,获得全人源scFv噬菌体抗体库.以GⅡ.6 P蛋白为固相抗原对抗体库进行4轮生物筛选,以选取的特异性抗NoV阳性噬菌体为模板,扩增scFv基因后,进行原核表达及纯化,并鉴定其特异性及中和性.结果 人源噬菌体scFv抗体库库容约为8.8×106PFU/mLo 4轮生物筛选共获得10株scFv,均能与GⅡ.4、GⅡ.6和GⅡ.17NoVP蛋白发生特异性结合,且对3株NoV毒株均有不同程度的阻断作用.结论 利用GⅡ.6 NoV感染者恢复期的PBMCs构建了全人源scFv噬菌体抗体库,筛选出的10株抗NoV scFv对NoV具有一定的中和作用.

关键词：诺如病毒、噬菌体抗体库、单链抗体

所属期刊栏目：35

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金;广东省自然科学基金项目;广东省重点领域研发计划

在线出版日期：2023-02-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1458-1464,1476