细胞嗜性差异的2株柯萨奇病毒A10型的构建与拯救

摘要：

目的 以Vero细胞及人横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞嗜性差异的柯萨奇病毒A10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)2个毒株为模板,分别构建感染性克隆,并完成病毒拯救,为CV-A10毒株的细胞嗜性研究奠定基础.方法 分别扩增Vero+/RD+及Vero-/RD+细胞嗜性差异的CV-A10毒株基因组,在5'端引入T7启动子序列,3'端引入polyA尾及Not I酶切位点.将扩增得到的基因组序列与线性化pBR322载体以无缝连接技术连接得到全长质粒,经线性化后分别与T7-RNA聚合酶表达质粒共转染RD细胞完成病毒拯救.通过病毒感染后细胞形态观察及间接免疫荧光试验,比较拯救毒株对Vero细胞嗜性的差异.结果 成功构建了 Vero细胞嗜性差异的CV-A10毒株2种感染性克隆,并在RD细胞内完成病毒拯救,序列测定结果表明拯救毒株与亲本毒株序列一致.拯救毒株rCV-A10-010195能够有效感染Vero细胞并形成典型的细胞病变(cytopathic effect,CPE),而rCV-A10-3482无法有效感染Vero细胞.结论 建立了2株Vero细胞嗜性差异的CV-A10毒株反向遗传操作系统,为CV-A10毒株细胞嗜性的研究奠定了基础.

关键词：Vero细胞、柯萨奇病毒A10型、感染性cDNA、病毒拯救、细胞嗜性

所属期刊栏目：35

分类号：Q75(分子遗传学)

资助基金：国家重大新药创制科技重大专项;湖北省技术创新重大专项

在线出版日期：2023-02-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1437-1442