前列腺癌组织中胶原三股螺旋重复蛋白1基因转录水平微滴数字PCR检测方法的建立及验证
目的 建立前列腺癌组织中胶原三股螺旋重复蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1)基因转录水平的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并进行验证.方法 根据GenBank中登录的CTHRCI基因序列设计引物,扩增CTHRC1保守区基因片段,并合成含有该基因片段的PUC57质粒.经2％琼脂糖凝胶电泳验证引物的特异性后,采用PUC57质粒验证ddPCR法的正确度、精密性,并确定检测限及线性范围.采用建立的ddPCR法检测复旦大学附属中山医院泌尿外科住院患者73份前列腺穿刺组织样本(前列腺癌组织40份,非前列腺癌组织33份)中的CTHRC1基因转录水平,同时采用试剂盒检测患者血清中的总前列腺特异抗原(total prostate specific antigen,TPSA)水平,将相应结果进行ROC曲线分析,以获得CTHRC1-TPSA联合检测对诊断前列腺癌的预测概率.结果 经2％琼脂糖凝胶电泳验证设计的引物具有良好的特异性.检测值和理论值之间的Log值差异均＜1,且拟合度高,R2=0.9959,表明该方法具有良好的正确度;重复性验证CV均＜10％,中间精密性验证CV均＜15％;该方法的检测限为100copies/μL;检测值在100～104copies/μL范围内,与理论值呈良好的线性相关性,R2=0.997 2.ddPCR法检测前列腺癌组织中CTHRC1基因转录水平显著高于非前列腺癌组织(Z=-4.339,P＜0.001).CTHRC1与TPSA联合诊断前列腺癌的ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.847,灵敏度为83.3％,特异性为67.7％.结论 ddPCR法可用于前列腺癌组织中CTHRC1基因转录水平的检测,与TPSA指标联合可提高临床诊断前列腺癌的准确性.
前列腺癌、胶原三股螺旋重复蛋白1、微滴数字PCR法、总前列腺特异抗原
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R737.25(肿瘤学)
国家自然科学基金;上海市科委生物医药科技支撑专项;上海市浦东新区卫生和计划;上海健康医学院师资人才百人库;周浦医院院级科研项目
2023-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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